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有什么好的方法从血液中分离细菌呢?

更新时间:2019-06-14

  败血症,是指致病菌或条件致病菌侵入血循环,并在血中生长繁殖,产生毒素而引发的急性全身性感染。败血症如得不到迅速控制,可由原发感染部位向身体其他部位发展,引起转移性脓肿。脓肿可发生在大脑的表面,导致脑膜炎;在心脏周围的包膜上,引起心包炎;在心脏的内膜上,引起心内膜炎;在大的关节中,引起关节疼痛或关节炎;在骨髓中,则导致骨髓炎。脓液积聚在体内任何地方可形成脓肿,严重者发生感染性休克和迁徙性病灶。

  检测败血症的传统方法,六合号码!就是分离细菌并在在一种特定培养基上培养菌落。这首先是通过快速离心血液来完成的,将血细胞和细菌带入沉淀,然后铺在血琼脂平板上,等待菌落生长。这种较老的方法受时间限制,需要1-7天完成,而且许多细菌不能在标准培养基上培养。

  血液中细菌检测的现代方法包括分离和检测细菌核酸。事实上,大多数细菌都是通过它们的16S rRNA来检测和分类的,但是同样的上游方法也可以用来分离细菌的DNA。本文将介绍从血液中分离细菌核酸的三种主要技术:(1)直接分离;(2)离心和过滤;(3)亲和下拉。有很多方法可以从血液中分离细菌,选择哪一个取决实验设置和个人偏好。

  从人类血液中分离RNA的主要问题是存在于血细胞中的高浓度RNA酶。如果试图裂解血细胞,然后分离细菌RNA,将会得到很低的产量,因为从血细胞释放的RNA酶会降解所有类型的RNA。所以需要使用一些试剂,在使RNA酶失活的条件下进行裂解。裂解后,可以使用特定的引物逆转录RNA。

  从血液中提取细菌核酸的大多数现代方法都是基于血液和细菌细胞的分离。这就防止了来自细菌RNA的信号被大量的人RNA所掩盖。

  红细胞直径为8 -15微米,而细菌细胞直径约为1微米。许多分离步骤依赖于密度梯度介质,如Ficoll-Paque 缓冲液。血液或分层于缓冲液之上,或与缓冲液混合,低速离心约380 g。血细胞的主要部分红细胞发生沉淀,而细菌则悬浮在缓冲液中,如下图。然后通过0.22 微米的膜进行过滤,这层膜不允许细菌细胞通过,收集到的细菌可用于分离DNA或RNA。

  当机体受到感染时,一种免疫反应是产生特异性针对表达于浸润性病原体表面的抗原的抗体。生物学家已经在许多实验室技术中利用了这种抗体-抗原的相互作用,包括对细菌细胞的亲和下拉。

  在亲和下拉过程中,在含有细菌的血液样本中添加磁珠或琼脂糖珠,这些珠被抗体或结合分子覆盖,这些抗体或结合分子特异识别细菌的表面抗原。抗体/分子-抗原的强结合作用使磁珠和细菌“粘”在一起。然后磁珠被应用到一个样品上,磁珠被磁场拉下来,样品被清洗以去除污染物。磁珠-细菌复合物用高盐缓冲液处理,打破化学键,并通过另一种磁性应用进一步分离,释放细菌细胞,同时保持磁珠的适当位置。

  一个常用的结合分子的例子,甘露糖结合凝集素。这种分子在抗生素耐药性情况下,与临床病原体表面结合,包括肠杆菌和链球菌,以及许多其他细菌和病毒。

  另外,可以通过磁性捕获人体细胞,让细菌从血浆中过滤出来,磁珠包被抗人CD45抗体,使人的细胞数量减少了98%。马会免费资料大全



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